靶向性CIK治疗慢性乙型肝炎研究

解放军454医院    张长法

一.

一.乙型肝炎流行病学现状

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染呈全球性分布

20亿人曾感染HBV，占全球人口1/3；   25%~40%最终将死于肝硬化或肝癌；每年因乙肝相关死亡75万例！  慢性HBV感染者3.85亿，占全球人口6%，其中亚洲占2/3 ，中国占1/3

2、我国乙肝的流行现状

2008年4月21日卫生部疾病控制局发布

12亿×9.75 =1.17亿（2002年我国乙肝表面抗原携带率为9.75%）

13亿×9.75 =1.27亿

13亿×7.18 = 0.93亿（2006年我国乙肝表面抗原携带率为7.18%）

1.27亿－0.97 = 3000万（相比之下减少3000多万）

近16年来，我国乙型肝炎流行病学变迁 HBsAg流行率明显下降

1992                     2006

调查人数            67,124                    81,950

调查省份数           30                        31

调查疾病监测点数     145                      160

检测方法             RIA                     EIA

人群HBsAg  %      9.8%                     7.2

5以下儿童HBsAg %  9.8%                     1.1

       1992、2006年全国乙型肝炎血清流行病学调查

我国各地HBsAg阳性率

 HBsAg % (95% CI)

地区              1992              2006

华北               5.5              3.8 (3.0~4.7)

西北               8.7              4.9 (4.2~5.6)

东北               10.7             5.6 (4.4~6.8)

西南               8.9              7.9 (6.1~9.7)

华东               9.9              7.8 (6.6~8.9)

华中               12.8             9.1 (8.1~10.1)

          2006年全国乙型肝炎血清流行病学调查

二.目前抗病毒治疗突破与瓶颈

临床上治疗有了很大的进展：普通干扰素；聚乙二醇干扰素；核甘类药物

存在的问题：不能清除cccDNA,     病毒变异、疗程不确定性

三.我国慢性乙型肝炎治疗的困难

1.母婴垂直传染病例多,免疫耐受      2.幼年时感染多,免疫低下

3.cccDNA整合多,病程长              4.病毒基因变异多,多位点

四、CIK治疗慢乙肝临床疗效

307例患者接受治疗20周及随访24周  评价:

1.基线血清HBVDNA下降水平或清除率，       2.HBeAg消失或转换率

3.HBsAg的清除率                            4.肝功能的复常率

治疗方法和流程

从病人自身采外周血50－100ml————分离淋巴细胞，培养约2－3周————1%白蛋白生理盐水洗涤，悬浮于1%白蛋白生理盐水中————进行无菌和内毒素试验，确认淋巴细胞无污染————将CIK细胞通过输血器经静脉输给患者

免疫治疗的基本程序：

1、接诊；2、筛选；3、单采；4、细胞培养；5、回输治疗；6、治疗期观察；7、统计分析

筛选适合CIK治疗的患者（略）建立患者病历并准备（略）治疗前检查（略）

设备、材料和试剂：千级超洁净工作间、百级超洁净工作台、大容量低温离心机、CO2培养箱、倒置显微镜、血细胞分离机、大容量培养袋、无血清培养基、IL-2、INF-γ、IL-1、抗CD3单抗等

单采：治疗室护士遵医嘱测量生命体征并记录，给于空腹抽血并将血样标本送至检测室，检验科（检测HBV-DNA、检测肝功、肾功、血常规）。将患者带进单采室，把病历送至单采室护士，准备单采。

确认管路安装是否正确 ，固定袖带，无菌操作消毒后进行穿刺，按下DRAW键开始采血。记录采集时间。采集过程中严密观察患者生命体征及屏幕提示信息。严密观察针头处情况。

成功采集最终产品后贴标签于PBSC袋（注明患者姓名、性别、年龄、编号、总血量、采集量），将终产品通过递物口送到细胞室进行培养。

 细胞培养

将血袋内的血用50ml注射器抽出 ，大容量冷冻离心机以 3500 rpm, 4℃，离心5 min，用移液器将管内上清液弃去，加洗液（500ml生理盐水+0.25g人血白蛋白）至40ml，用5ml移液器将血混匀。此操作重复3次。

混匀的血细胞加入到2个培养袋（内含RPMI 1640、谷氨酰胺、0.25g人血白蛋白 ）中，加入白介素-2诱导其转化为CIK。

将培养袋放入二氧化碳培养箱中，37℃、5% CO2。

每天观察细胞生长状态，及时更换培养液；第8天做细菌检测，第10天收集1袋细胞做第一次回输，另1袋细胞收集做冻存。 

回输治疗

测量患者生命体征并记录 。

通知细胞室将0.9%生理盐水100ml和1ml、2ml注射器各一支送至递物窗口，填写回输者名单及时间，有特殊更改的要给予备注，通知患者进食等候。

回输前认真执行“三查七对”，核对无误进行回输，回输过程中要严密观察患者有无异常反应，若有异常及时通知相关医师。

回输结束后，观察患者20-30分钟无异常情况方许可患者离开 。

输液器特殊处理，针头和输液管分离，分别装入医用垃圾由医院统一销毁。

治疗期观察    随时观察病人的回输治疗反应，并作出相应处理，并记病程记录。

开出本次应做的化验检查单 。通知病人下次治疗时间。下次回输的前两天再次通知病人回输。

治疗过程中的检查（略）       治疗结束后的检查（略）    

治疗后的疗效评估指标

治疗过程中不同时间点（0、1、2、3、4月）的检测评价：

HBV-DNA清除率。                        与基线血清HBV- DNA水平下降log10数比较。

ALT复常的病人比例。                    HBeAg消失，HBeAg血清转换的病人比例。